發(fā)布日期：2021/07/20

革蘭氏染色法，是指細菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法，屬于復染法。

革蘭氏染色法的染色原理：通過(guò)結晶紫初染和碘液媒染后，在細菌細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，再用95%乙醇脫色。

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革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個(gè)步驟，未經(jīng)染色的細菌，由于其與周?chē)h(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難區別。經(jīng)染色后，陽(yáng)性菌呈紫色，陰性菌呈紅色，可以清楚地觀(guān)察到細菌的形態(tài)、排列及某些結構特征，從而用以分類(lèi)鑒定。

具體操作方法是：
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（1）制片。
取菌種培養物常規涂片、干燥、固定。 
要用活躍生長(cháng)期的幼培養物作革蘭氏染色；涂片不宜過(guò)厚，以免脫色不完全造成假陽(yáng)性；火焰固定不宜過(guò)熱（以玻片不燙手為宜）。 

（2）初染。
滴加結晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜）染色1-2min，水洗。

（3）媒染。
用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1min，水洗。 

（4）脫色。
用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脫色，直至流出的乙醇無(wú)紫色時(shí)，立即水洗。 
乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節：脫色不足，陰性菌被誤染成陽(yáng)性菌；脫色過(guò)度，陽(yáng)性菌被誤染成陰性菌。因而脫色時(shí)間一般為20-30s。
 
（5）復染。
用番紅液復染約2min，水洗。

（6）鏡檢。
干燥后，用油鏡觀(guān)察。菌體被染成藍紫色的是革蘭氏陽(yáng)性菌，被染成紅色的為革蘭氏陰性菌。 


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