發(fā)布日期：2022/07/11

微生物的檢測，無(wú)論在理論研究還是在生產(chǎn)實(shí)踐中都具有重要的意義。微生物生長(cháng)意味著(zhù)原生質(zhì)含量的增加，所以測定的方法也都直接或間接的以次為根據，而測定繁殖則都要建立在計數這一基礎上。微生物生長(cháng)的衡量，可以從其重量，體積，密度，濃度，做指標來(lái)進(jìn)行衡量。

 

生長(cháng)量測定法 

1、體積測量法：又稱(chēng)測菌絲濃度法。
原理：通過(guò)測定一定體積培養液中所含菌絲的量來(lái)反映微生物的生長(cháng)狀況。
菌絲濃度測定法是大規模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(cháng)的一個(gè)重要監測指標。這種方法比較粗放，簡(jiǎn)便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營(yíng)養物，結果會(huì )有一定偏差。

2、稱(chēng)干重法：
原理：利用離心或過(guò)濾法測定。一般干重為濕重的10-20%。稱(chēng)干重發(fā)法較為煩瑣，通常獲取的微生物產(chǎn)品為菌體時(shí)，常采用這種方法，如活性干酵母（activity  dry  yeast, ADY）,一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。

3、比濁法：
原理：微生物的生長(cháng)引起培養物混濁度的增高。通過(guò)紫外分光光度計測定一定波長(cháng)下的吸光值，判斷微生物的生長(cháng)狀況。該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長(cháng)監測。

4、菌絲長(cháng)度測量法：
方法：對于絲狀真菌和一些放線(xiàn)菌，可以在培養基上測定一定時(shí)間內菌絲生長(cháng)的長(cháng)度。

微生物計數法

1、血球計數板法:
這種方法簡(jiǎn)便，直觀(guān)，快捷，但只適宜于單細胞狀態(tài)的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子進(jìn)行計數，并且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。

2、染色計數法：
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀(guān)察計數，而直接用血球計數板法又無(wú)法區分死細胞和活細胞的不足，人們發(fā)明了染色計數法。

3、比例計數法：
將已知顆粒（如霉菌孢子或紅細胞）濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。

4、液體稀釋法：
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋?zhuān)鶕烙嫈?，從?適宜的三個(gè)連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15只裝培養液的試管中，經(jīng)培養后記錄每個(gè)稀釋度出現生長(cháng)的試管數，然后查最 大或然數表MPN（most probably number）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物限 量檢查。

5、平板菌落計數法：
這是一種最 常用的活菌計數法。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術(shù)。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時(shí)將菌液中的細菌進(jìn)行了一次分離培養，獲得了單克隆。

6、試劑紙法：
在平板計數法的基礎上，發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計數用。試劑紙法計數快捷準確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。

7、膜過(guò)濾法：
用特殊的濾膜過(guò)濾一定體積的含菌樣品，經(jīng)丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀(guān)察細胞的熒光，活細胞會(huì )發(fā)橙色熒光，而死細胞則發(fā)綠色熒光。

 

生理指標法

微生物的生長(cháng)伴隨著(zhù)一系列生理指標發(fā)生變化，例如酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量，含糖量，產(chǎn)氣量等，與生長(cháng)量相平行的生理指標很多，它們可作為生長(cháng)測定的相對值。

1、測定含氮量：
大多數細菌的含氮量為干重的12.5%，酵母為7.5%，霉菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過(guò)氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測氮氣法。

2、測定含碳量：
將少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或無(wú)機緩沖液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加熱30分鐘后冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長(cháng)下讀取吸光光度值，即可推算出生長(cháng)量。需用試劑做空白對照，用標準樣品做標準曲線(xiàn)。

 

3、還原糖測定法：
還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過(guò)還原糖的測定可間接反映微生物的生長(cháng)狀況，常用于大規模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(cháng)的常規監測。

4、氨基氮的測定：
方法是，離心發(fā)酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02N的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長(cháng)狀況。

5、其他生理物質(zhì)的測定：
P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙酰胞壁酸）等含量以及產(chǎn)酸，產(chǎn)氣，產(chǎn)CO2（用標記葡萄糖做基質(zhì)），耗氧，黏度，產(chǎn)熱等指標， 都可用于生長(cháng)量的測定。也可以根據反應前后的基質(zhì)濃度變化，最 終產(chǎn)氣量，微生物活性三方面的測定反映微生物的生長(cháng)。

 

 

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